(1)化合物結(jié)構(gòu)中官能團(tuán)的極性強(qiáng)弱：

　　官能團(tuán)的極性

　　(2)含官能團(tuán)的種類、 數(shù)目及排列方式等綜合因素對(duì)化合物極性的影響

　�、倩�合物中所含正電或負(fù)電等電性基團(tuán)越多，極性越強(qiáng)(如氨基酸強(qiáng)極性)。

　�、诨�合物所含的極性基團(tuán)數(shù)目越多，極性越強(qiáng)(葡萄糖極性強(qiáng)于鼠李糖)。

　�、鬯�含極性基團(tuán)相同時(shí)，非極性基團(tuán)越多，極性越弱(如高級(jí)脂肪酸極性弱)。

　�、芩帷�堿及兩性化合物，游離型極性弱，解離型極性強(qiáng)，存在狀態(tài)可隨pH改變。

　　(3)化合物極性與介電常數(shù)

　　化合物極性大體可依據(jù)介電常數(shù)(ε)的大小判斷，ε越大，極性越強(qiáng)。

　　3.簡(jiǎn)單吸附法的應(yīng)用

　　(1)用于化合物的精制：結(jié)晶與重結(jié)晶過(guò)程中加入活性炭脫色、脫臭。

　　注意：有時(shí)擬除去的色素不一定是親脂性的，故活性炭脫色不一定總能收到良好的效果。一般須根據(jù)預(yù)試結(jié)果先判斷色素的類型，再?zèng)Q定選用什么吸附劑處理為宜。

　　(2)用于化合物的濃縮：如活性炭吸附濃縮一葉堿。

　　4.吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離

　　(1)吸附劑及用量

　　主要吸附劑：硅膠、氧化鋁。

　　用量：一般為樣品量的30～60倍。

　　樣品極性較小、難以分離者，吸附劑用量可適當(dāng)提高至樣品量的l00～200倍。

　　規(guī)格：通常為100目左右。

　　如采用加壓柱色譜，還可以采用更細(xì)的顆粒，或甚至直接采用薄層色譜用規(guī)格。

　　(2)拌樣及裝樣

　　硅膠、氧化鋁吸附柱色譜，應(yīng)盡可能選用極性小的溶劑裝柱和溶解樣品，以利樣品在吸附劑柱上形成狹窄的原始譜帶。

　　如樣品在所選裝柱溶劑中不易溶解，則可將樣品用少量極性稍大溶劑溶解后,再用少量吸附劑拌勻,并在60℃下加熱揮盡溶劑，置P205真空干燥器中減壓干燥、研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。

　　(3)洗脫

　　洗脫溶劑宜逐步增加，但跳躍不能太大。實(shí)踐中多用混合溶劑，并通過(guò)巧妙調(diào)節(jié)比例以改變極性，達(dá)到梯度洗脫分離物質(zhì)的目的。

　　注意：一般，混合溶劑中強(qiáng)極性溶劑的影響比較突出，故不可隨意將極性差別很大的兩種溶劑混合在一起使用。實(shí)驗(yàn)室中最常應(yīng)用的混合溶劑組合如表所示：

　　吸附柱色譜常用混合洗脫溶劑

　　(4)添加溶劑的選擇

　　分離酸性物質(zhì)：選用硅膠(顯酸性)，洗脫溶劑加入適量乙酸，防止拖尾。

　　分離堿性物質(zhì)：選用氧化鋁(顯弱堿性)，洗脫溶劑加入適量氨、吡啶、二乙胺，防止拖尾。

　　(5)洗脫劑的選擇與優(yōu)化

　　通過(guò)薄層色譜法(TLC)進(jìn)行篩選

　　一般TLC展開(kāi)時(shí)使組分Rf值達(dá)到0.2～O.3的溶劑系統(tǒng)可選用為柱色譜分離該相應(yīng)組分的最佳溶劑系統(tǒng)。

　　5.聚酰胺吸附色譜

　　基本原理：氫鍵吸附。

　　適用化合物類型：酚類、醌類、黃酮類。

　　(1)聚酰胺的性質(zhì)及吸附原理

　　性質(zhì)：

　　商品聚酰胺均為高分子聚合物質(zhì)，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚、三氯甲烷及丙酮等常用有機(jī)溶劑。

　　對(duì)堿較穩(wěn)定，對(duì)酸尤其是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性較差，可溶于濃鹽酸、冰乙酸及甲酸。

　　聚酰胺色譜的分離機(jī)理：一般認(rèn)為是“氫鍵吸附”，即聚酰胺的吸附作用是通過(guò)其酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰胺鍵上的游離胺基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。至于吸附強(qiáng)弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。

　　固定相　　　　　　　　　　　　 　　　　移動(dòng)相

　　氫鍵：氫原子與電負(fù)性的原子X(jué)共價(jià)結(jié)合時(shí)，共用的電子對(duì)強(qiáng)烈地偏向X的一邊，使氫原子帶有部分正電荷，能再與另一個(gè)電負(fù)性高而半徑較小的原子Y結(jié)合，形成的XH┅Y型的鍵。

　　X、Y為氧(O)、氮(N)、氟(F)等電負(fù)性較大，且半徑較小的原子。

　　吸附強(qiáng)弱通常在含水溶劑中大致有下列規(guī)律：

　　①形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)

　　②成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成分子內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附即相應(yīng)減弱。如：

　�、鄯肿又蟹枷慊�程度高者，則吸附性增強(qiáng);反之，則減弱。如：

　�、芟疵撊軇┑挠绊�

　　洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序?yàn)椋?/P>

　　水<甲醇或乙醇(濃度由低到高)<丙酮<稀氫氧化鈉水溶液或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺(DMF)<尿素水溶液

　　(2)聚酰胺色譜的應(yīng)用

　�、賹�(duì)酚類、黃酮類等含酚羥基化合物可逆吸附，分離效果好，吸附容量大，適于制備分離。

　�、诳捎糜谏�物堿、萜類、甾體、糖類、氨基酸等其他極性與非極性化合物的分離。

　�、蹖�(duì)鞣質(zhì)的吸附特強(qiáng)，近乎不可逆，故用于植物粗提取物的脫鞣處理。

　　6.大孔吸附樹(shù)脂

　　性質(zhì)：一般為白色球形顆粒狀，通常分為非極性和極性兩類，對(duì)酸、堿均穩(wěn)定。

　　優(yōu)勢(shì)：

　�、俨僮骱�(jiǎn)便，樹(shù)脂可再生;

　�、诳芍貜�(fù)操作，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，收率恒定;

　�、奂饶苓x擇性吸附，又便于溶媒洗脫，且不受無(wú)機(jī)鹽干擾;

　�、芤话悴挥糜袡C(jī)溶媒，既保持傳統(tǒng)的中醫(yī)理論用藥特色，又最大限度的保留了其有效成分。

　　(1)吸附原理：

　�、龠x擇性吸附(由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果)

　　②分子篩性能(由其本身的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)決定)

　　(2)影響吸附的因素：

　�、俅罂讟�(shù)脂本身的性質(zhì)(比表面積、表面電性、極性、能否形成氫鍵等)。

　�、谙疵撊軇┑男再|(zhì)(極性、酸堿性)。

　�、郾环蛛x化合物的性質(zhì)(分子量、極性、能否形成氫鍵)。

　　注：大孔樹(shù)脂的色譜行為具有反相的性質(zhì)，被分離物質(zhì)的極性越大，其Rf值越大，越容易洗脫。

　　(3)大孔吸附樹(shù)脂的應(yīng)用：

　　主要用于天然化合物的分離和富集

　　預(yù)處理方法：用高濃度乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動(dòng)清洗，不時(shí)檢查流出的乙醇液，至流出的乙醇液與水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象，然后以大量的蒸餾水洗去乙醇即可。

　　(4)洗脫液的選擇：

　　洗脫液可選擇水、甲醇、乙醇、丙酮、不同濃度的酸堿液等。

　　一般方法如下：

　�、儆眠m量水洗，洗下單糖、鞣質(zhì)、低聚糖、多糖等極性物質(zhì)，用薄層色譜檢識(shí)，防止極性大的皂苷被洗下;

　�、�7O%乙醇洗，洗脫液中主要為皂苷，但也含有酚性物質(zhì)、糖類及少量黃酮，實(shí)驗(yàn)證明30%乙醇不會(huì)洗下大量的黃酮類化合物;

　�、�3%～5%堿溶液洗，可洗下黃酮、有機(jī)酸、酚性物質(zhì)和氨基酸;

　�、�10%酸溶液洗，可洗下生物堿、氨基酸;

　�、荼�酮洗，可洗下中性親脂性成分