第二節(jié)　藥品質(zhì)檢與體內(nèi)藥物檢測

　　一、藥品檢驗程序與項目

　　取樣→檢驗→記錄報告

　　其中檢驗包含：性狀、鑒別、檢查、含量或效價測定。

　　1.對取樣的要求：

　　(1)同批、真實、代表性的部分產(chǎn)品，取樣方法科學(xué);

　　(2)n≤100時：依據(jù)《藥品抽樣指導(dǎo)原則》取樣;

　　(3)n>100時：取樣件數(shù)應(yīng)為根號N;

　　(4)全批、多部位、等量取樣;

　　(5)一次取樣一般為3倍全檢量，貴重藥品2倍全檢量。

　　2.性狀

　　熔點測定法

　　測定方法：毛細(xì)管測定法

　　第一法用于測定易粉碎的固體藥品;

　　第二法用于測定不易粉碎的固體藥品，如脂肪、脂肪酸、石蠟、羊毛脂等;

　　第三法用于測定凡士林或其他類似物質(zhì)。

　　當(dāng)各品種項下未注明時，均系指第一法。

　　旋光度測定法

　　比旋度：偏振光透過長1dm，且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長與溫度下，測得的旋光度。

　　比旋度以[α]tD表示(規(guī)定溫度20℃、波長鈉光譜D線589.3nm、濃度1g/ml和旋光管長度1dm的旋光度)。

　　比旋度是旋光物質(zhì)的重要物理常數(shù)，可以用來區(qū)別藥物或檢查藥物的純雜程度，也可用來測定含量。

　　3.鑒別

　　常用鑒別方法有化學(xué)鑒別法、光譜鑒別法和色譜鑒別法。

　　(1)化學(xué)鑒別法

　　常見的呈色反應(yīng)：

　　阿司匹林水解后與三氯化鐵的反應(yīng)(紫堇色);

　　去氧腎上腺素與三氯化鐵試液反應(yīng)顯紫色;

　　腎上腺素與三氯化鐵試液反應(yīng)則顯翠綠色。

　　重氮化-偶合反應(yīng)(芳香第一胺反應(yīng))：磺胺甲噁唑與亞硝酸鈉、β-萘酚的反應(yīng)。

　　雙縮脲反應(yīng)：鹽酸麻黃堿與硫酸銅的反應(yīng)。

　　Vitali反應(yīng)(托烷類生物堿反應(yīng))：硫酸阿托品與醇制氫氧化鉀的反應(yīng)。

　　Marquis反應(yīng)：嗎啡與甲醛-硫酸的反應(yīng);

　　硫色素反應(yīng)：維生素B1與鐵氰化鉀的反應(yīng);

　　褪色反應(yīng)：司可巴比妥鈉可使碘試液褪色，維生素C可使二氯靛酚鈉試液褪色。

　　常見的沉淀反應(yīng)：

　　苯巴比妥與重金屬銀鹽的反應(yīng)：一銀鹽，二銀鹽;

　　葡萄糖與堿性酒石酸銅的反應(yīng)。

　　常見的氣體生成反應(yīng)：

　　尼可剎米與氫氧化鈉的反應(yīng)：二乙胺。

　　常見的焰色反應(yīng)：

　　鈉鹽—鮮黃色;鉀鹽—紫色;鈣鹽—磚紅色。

　　(2)光譜鑒別法：紫外光譜法和紅外光譜法。

　　光譜范圍：

　　200nm～400nm為紫外區(qū);

　　400nm～760nm為可見區(qū);

　　760nm～2500nm為近紅外區(qū);

　　2.5μm～25μm(波數(shù)4000～400cm-1)為中紅外光區(qū)。

　　紫外光譜鑒別法(UV)：比較最大或最小吸收波長。

　　紅外分光光度法(IR)：縱坐標(biāo)為透光率(T%);橫坐標(biāo)為紅外光波數(shù)(cm-1)。

　　官能團區(qū)：4000～1300cm-1

　　指紋區(qū)：1300～400cm-1

　　(3)色譜鑒別法：一種分離分析方法。

　　保留時間tR　從進樣開始到某個組分色譜峰頂點的時間間隔。

　　半高峰寬Wh/2=2.355σ　峰高一半處的峰寬。

　　峰寬W=4σ=1.699Wh/2　色譜峰兩側(cè)的拐點作切線，在基線上的截距。

　　峰高h(yuǎn)　組分色譜峰頂點至?xí)r間軸的垂直距離。

　　峰面積A　組分色譜峰與基線圍成的區(qū)域的面積。

　　描述色譜峰的三大參數(shù)：

　　①峰位(用保留時間表示，用于定性);

　　②峰高或峰面積(用于定量);

　�、鄯鍖�(用于衡量柱效)。

　　用于鑒別的色譜法有薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)

　　TLC法一般采用對照品(標(biāo)準(zhǔn)品)比較法，要求供試品斑點的比移值(Rf)與對照品的一致。

　　HPLC法一般采用對照品(標(biāo)準(zhǔn)品)比較法，要求供試品溶液中藥物色譜峰的保留時間(tR)與對照品的一致。

　　4.檢查(純度檢查)

　　化學(xué)法、光譜法、色譜法。

　　(1)化學(xué)分析法—雜質(zhì)的限量檢查

　　雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。

　　一般雜質(zhì)檢查常用

　　方法對比： 藥物 　化學(xué)反應(yīng) 顏色(渾濁)

　　雜質(zhì)對照品(定量)　化學(xué)反應(yīng) 顏色(渾濁)

　　常見檢查：

　　阿司匹林溶液澄清度檢查，檢測不溶于碳酸鈉的酯類;

　　重金屬檢查(以鉛為代表)，pH3.5的醋酸鹽緩沖液，反應(yīng)試劑為硫代乙酰胺。

　　熾灼殘渣：

　　檢查藥物中的無機雜質(zhì)，溫度700℃～800℃;

　　若繼續(xù)重金屬檢查，則用500℃～600℃。

　　(2)光譜分析法

　　特殊雜質(zhì)：在特定波長處具有顯著吸收的特定有關(guān)物質(zhì)。

　　常見檢查

　　腎上腺素中的酮體——紫外-可見分光光度法

　　地蒽酚中的二羥基蒽醌——紫外-可見分光光度法

　　硫酸阿托品中的莨菪堿——旋光度法

　　(3)色譜分析法

　　特定雜質(zhì)、有關(guān)物質(zhì)與殘留溶劑的檢查。

　　薄層色譜法：雜質(zhì)對照(有雜質(zhì)對照品)、自身稀釋對照(無雜質(zhì)對照品)。

　　高效液相色譜法：內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法(有雜質(zhì)對照品)、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法、面積歸一化法。

　　氣相色譜法(GC)：主要檢查殘留溶劑。

　　內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法。

　　5.含量與效價測定

　　含量測定：化學(xué)分析法與儀器分析法;

　　效價測定：生物活性測定法。

　　(1)化學(xué)分析法(滴定分析法)

　　滴定液：裝在滴定管里用來和藥物反應(yīng)的試液。

　　指示劑：用來指示反應(yīng)終點的試劑。

　�、偎釅A滴定法：適用于酸、堿藥物的含量測定。常用滴定液：鹽酸滴定液、氫氧化鈉滴定液。指示劑：甲基紅、酚酞。如芳酸類藥物的含量測定。

　�、诜撬�溶液滴定法：適于酸堿性不太強的有機堿或有機酸類藥物的含量測定。

　　有機弱堿的含量測定——非水堿量法，常以冰醋酸(或冰醋酸-醋酐)為溶劑，高氯酸的冰醋酸溶液為滴定液，結(jié)晶紫為指示劑(或電位法)。應(yīng)用：生物堿類藥物的含量測定。

　　特殊：

　　有機堿的氫鹵酸鹽，在測定前要加入醋酸汞試液——目的：消除氫鹵酸對滴定的干擾。

　　有機堿的硫酸鹽，在測定前要添加醋酐。

　　有機弱酸的含量測定——非水酸量法，以乙二胺(或DMF)為溶劑，甲醇鈉為滴定液，麝香草酚藍(lán)作指示劑。

　�、垩趸�還原滴定法

　　包括碘量法、鈰量法、亞硝酸鈉滴定法。

　　碘量法：

　　藥物滴定液指示劑應(yīng)用

　　直接碘量法還原性碘淀粉維生素C

　　剩余碘量法還原性碘、硫代硫酸鈉淀粉

　　(近終點加入)復(fù)方對乙酰氨基

　　酚片中的咖啡因

　　置換碘量法氧化性KI，硫代硫酸鈉淀粉

　　鈰量法：硫酸鈰為滴定液，鄰二氮菲作指示劑。鈰菲組合。

　　應(yīng)用：硫酸亞鐵片、葡萄糖酸亞鐵及其制劑、富馬酸亞鐵及其制劑、硝苯地平。

　　亞硝酸鈉滴定法：亞硝酸鈉滴定液，永停滴定法指示終點。

　　應(yīng)用：凡藥物分子的結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在的芳伯氨基，如鹽酸普魯卡因。

　　滴定法小結(jié)：

　　方法滴定液終點指示

　　酸堿滴定NaOH 酚酞(無色→粉紅)

　　HCl 甲基紅-溴甲酚綠(綠→暗紫)

　　氧化還原滴定碘量法I2淀粉(無色→藍(lán)紫)

　　Na2S2O3淀粉(藍(lán)→亮綠)

　　亞硝酸滴定法NaNO2永停法

　　鈰量法Ce(SO4)2鄰二氮菲(紅→綠)

　　非水溶液滴定非水堿量法HClO4結(jié)晶紫(紫→藍(lán))

　　非水酸量法甲醇鈉麝香草酚藍(lán)

　　(2)紫外-可見分光光度法

　　定量依據(jù)是Lambert-Beer定律：

　　A=-lgT=-lgI/I0=Ecl

　　式中E為吸收系數(shù)，有兩種：

　　當(dāng)濃度單位為mol/L時，E為摩爾吸收系數(shù)(ε);

　　當(dāng)濃度單位為1g/100ml時，E為百分吸收系數(shù)(E1%1cm)。

　　定量方法：對照品比較法、吸收系數(shù)法。

　　(3)高效液相色譜法HPLC

　　常用定量方法：

　　①內(nèi)標(biāo)法：避免樣品前處理及進樣體積誤差的影響;

　�、谕鈽�(biāo)法。

　　注：內(nèi)標(biāo)法公式中有f(校正因子);外標(biāo)法無。

　　(4)抗生素微生物檢定法

　　管碟法和濁度法

　　應(yīng)用：硫酸慶大霉素的含量測定

　　6.非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查

　　檢查非無菌藥品的污染，3個通則：

　　“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”

　　“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法”

　　“非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”

　　計數(shù)方法：平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法(MPN)。

　　二、體內(nèi)藥物檢測

　　1.生物樣品的種類：體液、各種器官和組織。

　　體液主要包括血液、唾液、尿液等。

　　血液——最常用，全血、血漿和血清。

　　血漿、血清的區(qū)別：加抗凝劑(肝素、EDTA、草酸鹽、枸櫞酸鹽)離心后得血漿、不加抗凝劑離心后得血清。

　　2.體內(nèi)樣品測定法

　　免疫分析法—靈敏度高、檢測限低—臨床用;

　　色譜分析法—專屬性好—復(fù)雜樣品。