第二節(jié) 氣相色譜法和高效液相色譜法

　　掌握氣相色譜法和高效液相色譜法的基本原理;色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的主要內(nèi)容;氣相色譜法和高效液相色譜法在藥物鑒別、檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用。了解氣相色譜儀和高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)。

　　一、氣相色譜法： 以氣體為流動(dòng)相的色譜法，具有分離效能高、靈敏度高、樣品用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。

　　(一)基本原理

　　1.基本概念

　　色譜峰參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)

　　保留值：保留時(shí)間、死時(shí)間、調(diào)整保留時(shí)間

　　峰寬：標(biāo)準(zhǔn)差、半峰寬、峰寬

　　2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉(zhuǎn)移過(guò)程，分解為間歇的在單個(gè)塔板中的分配平衡過(guò)程

　　理論塔板數(shù) n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色譜柱的理論塔板數(shù)越多，柱效越高;同樣長(zhǎng)度中塔板高度越小，柱效越高。

　　3.速率理論：主要說(shuō)明使色譜峰擴(kuò)張而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A為渦流擴(kuò)散項(xiàng)。采用適當(dāng)粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴(kuò)散，開(kāi)管毛細(xì)管柱A=0

　　B為縱向擴(kuò)散系數(shù)。為減小縱向擴(kuò)散可采用較高的載氣流速;或選擇分子量大的重載氣;也可降低柱溫。

　　C為傳質(zhì)阻抗系數(shù)。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應(yīng)適當(dāng)減少固定液用量。

　　范氏方程說(shuō)明填充均勻程度、載體粒度、載氣種類、載氣流速、柱溫、固定液層厚度對(duì)柱效的影響。

　　(二)氣相色譜儀

　　1.氣源：FID常用載氣多為氮?dú)饣蚝��?TCD多用氦氣或氫氣為載氣;ECD多用氮?dú)饣驓鍤?/P>

　　2.進(jìn)樣及汽化系統(tǒng)

　　3.色譜柱和柱溫箱

　　4.檢測(cè)器

　　熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD：濃度型檢測(cè)器。構(gòu)造簡(jiǎn)單、測(cè)定范圍廣、樣品不破壞，但靈敏度較低。

　　電子捕獲檢測(cè)器ECD：靈敏度高、選擇性好。對(duì)無(wú)電負(fù)性基團(tuán)的化合物響應(yīng)低。

　　氫離子火焰檢測(cè)器FID：質(zhì)量型檢測(cè)器。靈敏度高、響應(yīng)快、線性范圍寬，最常用。

　　(三) 應(yīng)用 1.鑒別：利用保留值進(jìn)行鑒別。

　　2.檢查

　　(1) 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)含量

　　(2) 外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身對(duì)照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法

　　(5) 面積歸一化法：一般不用于微量雜質(zhì)檢查

　　3.含量測(cè)定：外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法

　　內(nèi)標(biāo)物要求：①原樣品中不含有的組分;②保留時(shí)間與待測(cè)組分相近，但能完全分離;③純度合乎要求。

　　二、高效液相色譜法

　　(一)速率理論：高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻抗項(xiàng)。由于液體黏度比載氣大得多，而且柱溫多為室溫，其縱向擴(kuò)散項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)。范氏方程簡(jiǎn)化為 H=A +Cμ

　　(二) 高效液相色譜儀： 1.高壓輸液泵 2.色譜柱：分析型和制備型 3.進(jìn)樣閥 4.檢測(cè)器：①固定波長(zhǎng)檢測(cè)器;②可變波長(zhǎng)檢測(cè)器;③光二極管陣列檢測(cè)器

　　(三)應(yīng)用：與氣相色譜法相似

　　三、色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)方法

　　1.理論塔板數(shù)：不得低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論塔板數(shù)

　　2.分離度：除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5

　　3.重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下對(duì)照品2連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有規(guī)定外，拖尾因子應(yīng)在0.95～1.05之間