五、問(wèn)答題

　　1. PCR技術(shù)的工作原理是什么?(5分)

　　【變性：使模板DNA完全變性成為單鏈

　　退火：使引物與模板 DNA退火結(jié)合

　　延伸：DNA聚合酶以dNTP為底物催化DNA合成反應(yīng)�！�

　　六、論述題

　　1.印漬雜交的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些?主要用途是什么?(6分)

　　【目前常用的生物大分子印漬技術(shù)包括：

　　(1)：DNA印漬技術(shù)(DNA blotting)，被廣泛稱為Southern blotting。它主要用于基因組DNA的分析，尤其是用于某種基因在基因組中的定位研究，也可以用于分析重組質(zhì)粒和噬菌體。

　　(2)RNA印漬技術(shù)(RNA blotting)，也稱為 Northern blotting。主要用于檢測(cè)某一組織或細(xì)胞中已知的特異mRNA的表達(dá)水平以及比較不同組織和細(xì)胞的同一基因的表達(dá)情況。

　　(3)蛋白質(zhì)的印漬分析，也稱為免疫印漬技術(shù)(immunoblotting)或Western blotting。主要用于檢測(cè)樣品中特異性蛋白質(zhì)的存在、細(xì)胞中特異蛋白質(zhì)的半定量分析以及蛋白分子的相互作用研究等。

　　斑點(diǎn)印漬、原位雜交也是常用的分子雜交方法。在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的DNA芯片可以在小面積的表面固定數(shù)千甚至上萬(wàn)個(gè)探針用于細(xì)胞樣品中基因表達(dá)譜及基因突變的分析。生物芯片對(duì)核酸的研究工作以及未來(lái)的診斷技術(shù)都將產(chǎn)生革命性的影響�！�

　　2.核酸分子雜交的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些?主要用途是什么?(8分)

　　【目前常用的生物大分子印漬技術(shù)包括：

　　(1)：DNA印漬技術(shù)(DNA blotting)，被廣泛稱為Southern blotting。它主要用于基因組DNA的分析，尤其是用于某種基因在基因組中的定位研究，也可以用于分析重組質(zhì)粒和噬菌體。

　　(2)RNA印漬技術(shù)(RNA blotting)，也稱為 Northern blotting。DNA印漬技術(shù)主要用于檢測(cè)某一組織或細(xì)胞中已知的特異mRNA的表達(dá)水平以及比較不同組織和細(xì)胞的同一基因的表達(dá)情況。

　　(3)斑點(diǎn)雜交，不經(jīng)電泳分離直接將樣品點(diǎn)在NC膜上用于雜交。

　　(4)原位雜交在組織切片或涂片上進(jìn)行雜交。

　　(5)DNA芯片可以在小面積的表面固定數(shù)千甚至上萬(wàn)個(gè)探針用于細(xì)胞樣品中基因表達(dá)譜及基因突變的分析。生物芯片對(duì)核酸的研究工作以及未來(lái)的診斷技術(shù)都將產(chǎn)生革命性的影響�！�