自考《儀器分析、檢驗儀器原理及維護》專項習(xí)題：論述

　　論述題

　　1. 簡述醫(yī)學(xué)檢驗中常用的熒光顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)及用途。

　　1. 答：熒光顯微鏡是以紫外線為光源來激發(fā)生物標(biāo)本中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生能觀察到的各種顏色熒光的一種光學(xué)顯微鏡。

　　熒光顯微鏡是由光源、濾色系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡主要區(qū)別在于光源和濾光片不同。通常用高壓汞燈作為光源，可發(fā)出紫外線和短波長的可見光;濾光片有二組，第一組稱激發(fā)濾片，位于光源和標(biāo)本之間，僅允許能激發(fā)標(biāo)本產(chǎn)生熒光的光通過(如紫外線);第二組是阻斷濾片，位于標(biāo)本與目鏡之間，可把剩余的紫外線吸收掉，只讓激發(fā)出的熒光通過，這樣既有利于增強反差，又可保護眼睛免受紫外線的損傷。光學(xué)系統(tǒng)主要有反光鏡、聚光鏡、目鏡、物鏡、照明系統(tǒng)等組成。

　　熒光顯微鏡可用于觀察檢測細(xì)胞中能與熒光染料特異結(jié)合的特殊蛋白、核酸等，其標(biāo)本染色簡便、熒光圖像色彩鮮亮，而且敏感度較高。

　　2. 簡述等電聚焦電泳法的原理、特點。

　　2. 答：原理：不同的蛋白質(zhì)等電點不同，如果分子處于pH和等電點一致的溶液中，則泳動就停止進行。如果溶液內(nèi)的pH是位置的函數(shù)，或者說有一個pH的位置梯度，那么在一個穩(wěn)定連續(xù)的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質(zhì))中進行分離，每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點相一致的pH位置，在那里不再移動(稱為聚焦)。由于在這點凈電荷(正負(fù)抵消)為零，因而又稱等電聚焦。

　　特點：①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定的、連續(xù)的、線性的pH梯度。②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰的、鮮明的區(qū)帶界面③電泳速度快。④分辨率高。⑤加入樣品的位置可任意選擇。⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點。⑦適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。

　　3. 簡述雙向凝膠電泳(二維電泳)的工作原理。

　　答：第一維采用等電聚集(isoelectric focusing, IEF)電泳。當(dāng)把蛋白質(zhì)加人到含有pH梯度的載體時，如果蛋白質(zhì)所在位置的pH值與其等電點不同，則該蛋白質(zhì)會帶一定量的正電荷或負(fù)電荷，在外加強電場的作用下，蛋白分子就會分別向正極或負(fù)極泳動，直到pH值與其等電點相等的位置，蛋白質(zhì)不再泳動，而濃縮成狹窄的區(qū)帶。

　　第二維采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。蛋白質(zhì)的電泳遷移率取決于各種蛋白質(zhì)所帶的靜電荷、分子量的大小以及形狀的不同。SDS-PAGE就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進行分離。蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過雙向凝膠電泳兩次分離后，其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點狀。

　　4. 簡述微生物自動鑒定及藥敏分析系統(tǒng)基本結(jié)構(gòu)與相應(yīng)功能。

　　答：(1)測試卡(板)：是系統(tǒng)的工作基礎(chǔ)，各種不同的測試卡(板)具有不同的功能。最基本的測試卡(板)包括革蘭氏陽、陰性菌鑒定卡(板)，革蘭氏陽、陰性菌藥敏試驗卡(板)。使用時應(yīng)根據(jù)涂片和革蘭氏染色結(jié)果進行選擇。

　　(2) 菌液接種器：可分為真空接種器和活塞接種器，以真空接種器較為常用�？蓪⑴浜玫木�液接種至測試卡中。

　　(3)培養(yǎng)和監(jiān)測系統(tǒng)：測試卡(板)接種菌液后即可放入孵箱/讀數(shù)器中進行培養(yǎng)和監(jiān)測。監(jiān)測系統(tǒng)每隔一定時間對每孔的透光度或熒光物質(zhì)的變化進行檢測，并將檢測數(shù)據(jù)傳送給數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。

　　(4)數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)：數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)就象整個系統(tǒng)的神經(jīng)中樞，始終保持與孵箱/讀數(shù)器、打印機的聯(lián)絡(luò)，控制孵箱溫度，自動定時讀數(shù)，負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)換及分析處理。

　　5. 簡述自動化抗生素敏感性試驗的檢測原理。

　　答：自動化抗生素敏感性試驗使用藥敏測試板(卡)進行測試，其實質(zhì)是微型化的肉湯稀釋試驗。將抗生素微量稀釋在條孔或條板中，加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育，儀器每隔一定時間自動測定細(xì)菌生長的濁度，或測定培養(yǎng)基中熒光指示劑的強度或熒光原性物質(zhì)的水解，觀察細(xì)菌的生長情況。得出待檢菌在各藥物濃度的生長斜率，經(jīng)回歸分析得到最低抑菌濃度MIC值，并根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)得到相應(yīng)敏感度：敏感“S”、中度敏感“MS”和耐藥“R”。