細菌革蘭氏染色及形態(tài)識別

　　【準備】

　　1.個人準備 穿好工作服，戴好口罩、帽子。

　　2.物品準備 查看實驗所需器材、試劑是否齊全，如不全，應及時向工作人員提出。

　　3.本實驗所需器材試劑： 玻片、玻璃鉛筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴、計時器、吸水紙、顯微鏡、擦鏡紙、生理鹽水、蒸餾水、細菌培養(yǎng)物、結晶紫染液、盧戈碘液、95%酒精、稀釋石炭酸復紅染液、乙醚。

　　【操作】

　　1.涂片：取玻片一張，用玻璃鉛筆在玻片上劃兩個直徑1.5cm左右的圓。用接種環(huán)在圓圈內(nèi)各加1～2滴生理鹽水。

　　2.接種環(huán)滅菌后，分別取細菌培養(yǎng)物少許，在生理鹽水中磨勻。

　　3.干燥：將標本涂片標本面向上，置于酒精燈火焰高處慢慢烘干，切不可在火焰上燒干。

　　4.固定：細菌的固定常用火焰加熱法，即將上述已干的涂片在酒精燈火焰中通過3次。

　　5.初染：將結晶紫染液加于制好的涂片上，染色1min。

　　6.用細流水沖洗，甩去積水。

　　7.媒染：加盧戈碘作用1min，用細流水沖洗，甩去積水。

　　8.脫色：滴加95%酒精數(shù)滴，搖動玻片數(shù)秒鐘，使均勻脫色，

　　9.然后斜持玻片，再滴加酒精，直到流下的酒精無色為止(約0.5min)，用細流水沖洗，甩去積水。

　　10.復染：加稀釋石炭酸復紅染0.5min

　　11.用細流水沖洗，甩去積水。

　　12.鏡檢：標本片用吸水紙吸干后，在涂片上滴加鏡油，置顯微鏡下檢查。

　　13.識別細菌的革蘭氏染色結果(陽性或陰性)，報告結果。

　　14.斷細菌形態(tài)特征(球菌、桿菌或螺旋菌)，報告結果。

　　【操作后】

　　1.用滴有乙醚的擦鏡紙擦拭油鏡鏡頭。

　　2.關閉顯微鏡電源。

　　3.將使用過的一次性器材，剩余標本置于污物桶中。

　　【注意事項】

　　1.載玻片要潔凈無油跡，

　　2.滴生理鹽水和取菌不宜過多，涂片要均勻，不宜過厚，以免脫色不全造成假陽性。

　　3.熱固定溫度不宜過高，否則會改變甚至破壞細胞形態(tài)。

　　4.水洗時不要直接沖洗涂面，水流不宜過急，以免涂片菌膜脫落。

　　5.革蘭氏染色結果是否正確，乙醇脫色是關鍵環(huán)節(jié)，應嚴格掌握脫色時間，脫色不足，陰性菌誤染成陽性菌;脫色過度，陽性菌誤染成陰性菌。