�、偈鼓康幕�因與載體相結(jié)合

　�、趯⒛康幕�因?qū)�入受體細胞

　�、垓炞C目的基因的表達是否符合特定性狀要求

　�、芴崛∧康幕�因

　　A、③②④①

　　B、②④①③

　　C、④①②③

　　D、③④①②

　　解析：選C。在基因工程操作中，首先要提取目的基因，然后使目的基因與載體結(jié)合，再將目的基因?qū)�入受體細胞，最后是目的基因的檢測與表達。

　　2、以下獵取目的基因的方法中需要模板的是()

　�、購幕�因文庫中獵取目的基因②利用PCR技術(shù)擴增目的基因③反轉(zhuǎn)錄法④通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成DNA

　　A、①②③④

　　B、①②③

　　C、②③④

　　D、②③

　　解析：選D。PCR技術(shù)利用的是DNA雙鏈復(fù)制原理。馬上DNA雙鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈DNA，作為聚合反應(yīng)的模板。反轉(zhuǎn)錄法是以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，先反轉(zhuǎn)錄形成互補的單鏈DNA，再合成雙鏈DNA。①④那么均不需要模板。

　　3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷下述30多次循環(huán)：95℃下使模板DNA變性、解鏈→55℃下復(fù)性(引物與DNA模板鏈結(jié)合)→72℃下引物鏈延伸(形成新的脫氧核苷酸鏈)。以下有關(guān)PCR過程的表達中不正確的選項是()

　　A、變性過程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵，也可利用解旋酶實現(xiàn)

　　B、復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補配對原那么完成

　　C、延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸

　　D、PCR與細胞內(nèi)DNA復(fù)制相比所需酶的最適溫度較高

　　解析：選C。此題考查PCR擴增過程。解題的關(guān)鍵是要全面理解PCR擴增過程。DNA分子被破壞是指DNA分子被解旋成兩條長鏈，破壞的部位是連接兩條長鏈之間的氫鍵，方法有多種，用解旋酶、高溫等都可使DNA解旋。B項中引物有兩種，分別與模板DNA鏈3′端的互補序列互補配對。C項中的原料不正確，合成DNA的原料是四種脫氧核苷酸。PCR技術(shù)中DNA合成過程中的溫度在70～75℃。

　　4、以下關(guān)于基因表達載體構(gòu)建的相關(guān)表達，不正確的選項是()

　　A、需要限制酶和DNA連接酶

　　B、必須在細胞內(nèi)進行

　　C、抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因

　　D、啟動子位于目的基因的首端

　　解析：選B�；�因表達載體構(gòu)建是目的基因與載體結(jié)合，在此過程中需用同一種限制酶切割目的基因與載體，用DNA連接酶將相同的末端連接起來;基因表達載體的構(gòu)建是在細胞外進行的;基因表達載體包括啟動子(位于基因首端使轉(zhuǎn)錄開始)、終止子、目的基因和標(biāo)記基因(鑒別受體細胞中是否含有目的基因，如抗生素抗性基因)。

　　5、我國中科院上海生化所合成了一種具有鎮(zhèn)痛作用而又可不能像嗎啡那樣使病人上癮的藥物——腦啡肽多糖(類似于人體中的糖蛋白)。在人體細胞中糖蛋白必須通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的進一步加工才能形成。假如要采納基因工程和發(fā)酵工程技術(shù)讓微生物來生產(chǎn)腦啡肽多糖，應(yīng)該用以下哪種微生物作受體細胞()

　　A、大腸桿菌

　　B、酵母菌

　　C、T4噬菌體

　　D、大腸桿菌質(zhì)粒

　　解析：選B。腦啡肽多糖的化學(xué)本質(zhì)類似于人體中的糖蛋白。從題中能夠看出，糖蛋白的合成必須通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的進一步加工，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體只存在于真核生物的細胞內(nèi)，大腸桿菌是原核生物，只有核糖體，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，T4噬菌體屬于病毒，沒有細胞結(jié)構(gòu)，自己不能合成蛋白質(zhì);酵母菌是真核生物，其細胞中有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體，能夠合成糖蛋白。

　　6、上海醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛。他們還研究出一種可大大提高基因表達水平的新方法，使轉(zhuǎn)基因動物乳汁中的藥物蛋白含量提高了30多倍，標(biāo)志著我國轉(zhuǎn)基因研究向產(chǎn)業(yè)化的目標(biāo)又邁進了一大步。以下與此有關(guān)的表達中，正確的選項是()

　　A、人白蛋白基因開始轉(zhuǎn)錄時，在DNA聚合酶的作用下以DNA分子的一條鏈為模板合成mRNA

　　B、所謂“提高基因表達水平”是指設(shè)法使牛的乳腺細胞中含有更多的人白蛋白基因

　　C、人們只能在轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中獵取到人白蛋白，是因為人白蛋白基因只在轉(zhuǎn)基因牛的乳腺細胞中是純合的，在其他細胞中那么是雜合的

　　D、假如人白蛋白基因的序列是的，能夠用化學(xué)方法合成該目的基因

　　解析：選D。人白蛋白基因開始轉(zhuǎn)錄時，在RNA聚合酶的作用下以DNA分子的一條鏈為模板合成mRNA;所謂“提高基因表達水平”是指設(shè)法使牛的乳腺細胞中的人白蛋白基因更多地進行轉(zhuǎn)錄、翻譯，產(chǎn)生更多的人白蛋白;人們只能在轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中獵取到人白蛋白，是因為人白蛋白基因只在轉(zhuǎn)基因牛的乳腺細胞中表達。

　　7、下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答以下問題：

　　(1)一個圖l所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有________個游離的磷酸基團。

　　(2)假設(shè)對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。

　　(3)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，緣故是_______

　　(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點在于能夠防止------。

　　(5)為了獵取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入_____酶。

　　(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_______

　　(7)為了從cDNA文庫中分離獵取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在____________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。

　　解析：(1)該質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，經(jīng)SmaⅠ切割前，不含有游離的磷酸基團，經(jīng)SmaⅠ切割后形成平末端，含有2個游離的磷酸基團。

　　(2)SmaⅠ識別的是CCCGGG序列，切割點在C與G之間，SmaⅠ酶切位點越多，也確實是C-G堿基對越多，C與G之間的氫鍵(3個)比A與T之間的氫鍵(2個)數(shù)量多，其含量越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高。

　　(3)據(jù)圖1可知，SmaⅠ切割位點在抗生素抗性基因(標(biāo)記基因)中，據(jù)圖2可知，SmaⅠ切割位點在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因。

　　(4)用同一種限制酶處理質(zhì)粒和外源DNA，再用DNA連接酶連接時，往往會有三種連接形式：目的基因—質(zhì)粒、目的基因—目的基因(環(huán)化)、質(zhì)�！�質(zhì)粒(環(huán)化)，后兩種是我們不需要的，因而要進行篩選。用兩種限制酶處理質(zhì)粒和外源DNA，因形成的末端不同可幸免上述情況的發(fā)生。

　　(5)連接質(zhì)粒與目的基因的工具酶是DNA連接酶。

　　(6)抗生素抗性基因是標(biāo)記基因的一種，標(biāo)記基因的作用是供重組DNA鑒定和篩選。

　　(7)可依照目的基因是否表達成預(yù)期的蛋白質(zhì)進行目的基因的檢測，此題中預(yù)期的蛋白質(zhì)是蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白，因而可在蔗糖為惟一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。

　　答案：(1)0、2(2)高

　　(3)SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

　　(4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

　　(5)DNA連接

　　(6)鑒定和篩選含有目的基因的細胞

　　(7)蔗糖為惟一含碳營養(yǎng)物質(zhì)