13.(15分)(2014·天津卷)嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β­葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗：

　�、�.利用大腸桿菌表達BglB酶

　　(1)PCR擴增bglB基因時，選用______________________基因組DNA作模板。

　　(2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的bglB基因重組進該質(zhì)粒，擴增的bglB基因兩端需分別引入__________和__________不同限制酶的識別序列。

　　(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為________________________________。

　�、�.溫度對BglB酶活性的影響

　　(4)據(jù)圖1、2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會__________;為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在________(單選)。

　　A.50℃ B.60℃

　　C.70℃ D.80℃

　�、�.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性

　　在PCR擴增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選，可獲得能表達出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。

　　(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌相比，上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過程中________(多選)。

　　A.僅針對bglB基因進行誘變

　　B.bglB基因產(chǎn)生了定向突變

　　C.bglB基因可快速累積突變

　　D.bglB基因突變不會導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變

　　解析　(1)BglB由嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生，故PCR擴增bglB基因時，應(yīng)選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。(2)目的基因在與質(zhì)粒連接時，需連接在啟動子和終止子之間，且所用限制酶不能破壞啟動子、終止子和標(biāo)記基因，所以切割質(zhì)粒應(yīng)選用Nde I和BamH I兩種酶，則擴增的bglB基因兩端需分別引入Nde I和BamH I兩種酶的識別序列。(3)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌含有的bglB基因表達，合成了耐熱的纖維素酶，所以其獲得了降解纖維素的能力。(4)由圖2可知，80 ℃保溫30分鐘后，bglB酶的相對活性為0，所以此時該酶失活;由圖1可知：60 ℃～70 ℃時bglB酶的相對活性最高。70 ℃時，該酶活性易降低，所以為高效利用bglB酶降解纖維素應(yīng)最好將溫度控制在60 ℃。(5)在PCR擴增bglB基因時加入誘變劑僅對該基因進行誘變，可快速累積突變，但誘發(fā)基因突變時，突變?nèi)允遣欢ㄏ虻�，且突變的結(jié)果可以改變酶中氨基酸的數(shù)目。若用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌，可誘發(fā)其內(nèi)的任一基因突變，不能快速積累bglB基因突變，故A、C正確，B、D錯誤。

　　答案　(1)嗜熱土壤芽桿菌

　　(2)Nde I　BamH I

　　(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的bglB酶

　　(4)失活　B

　　(5)A、C