第二節(jié) 熒光分析法

　　了解熒光分析法的基本原理和應(yīng)用;熒光光度計的基本結(jié)構(gòu)。

　　一、基本原理

　　熒光的產(chǎn)生：此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學(xué)能等)而進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能，發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。

　　發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強度，除受激發(fā)光強度影響外，也與激發(fā)光的波長有關(guān)。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長處有最大吸收峰和最大發(fā)射峰。選擇激發(fā)光波長量接近于熒光分子的最大吸收峰波長，且測定光波量接近于最大發(fā)射光波峰時，得到的熒光強度也最大。

　　物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進行。

　　二、熒光分光光度計

　　激發(fā)光源→激發(fā)光單色器→樣品池

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　　發(fā)射光單色器→檢測器→數(shù)據(jù)記錄處理

　　樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發(fā)射光方向與激發(fā)光成直角。

　　三、應(yīng)用：熒光分析可用于鑒別和含量測定。一般采用對照品比較法測定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。